今天小編或?qū)槟憬忾_PCR反應(yīng)體系中，熒光染料法

       PCR的時(shí)候，你是否還在費(fèi)心的準(zhǔn)備冰盒，是否還在擔(dān)憂會(huì)否因?yàn)槭覝靥邔?dǎo)致酶活降低甚至失效，今天小編或?qū)槟憬忾_這些煩憂。

       在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中，加入過量熒光染料，該染料只與雙鏈DNA小溝結(jié)合的染料，并不與單鏈DNA鏈結(jié)合，而且在游離狀態(tài)不發(fā)出熒光，只有摻入DNA雙鏈中才可以發(fā)光，因此，在PCR體系中，隨著特異性PCR產(chǎn)物的指數(shù)擴(kuò)增，每個(gè)循環(huán)的延伸階段，染料摻入雙鏈DNA中，其熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。下圖以SYBR Green I染料為例：

反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR）

RT-PCR是一種將cDNA合成與PCR技術(shù)結(jié)合分析基因表達(dá)的快速靈敏的方法，主要用于對(duì)表達(dá)信息進(jìn)行檢測(cè)或定量分析。在實(shí)際應(yīng)用中，RT—PCR又常常分為一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR。